20 июнь 2017
0
Что такое спектрофотометр?

Прибор спектрофотометр. Типы, характеристики и устройство

Спектрофотометр - это инструмент, который измеряет интенсивность излучения или количество фотонов на разных длинах волн. Этот научный инструмент также используется для исследовательских целей в молекулярной биологии для измерения роста бактерий.

Спектрофотометр идентифицирует передачу определенного вещества путем определения наблюдаемого цвета. Инструмент обычно используется для измерения концентрации РНК и ДНК. Кроме того, ферментативные и химические реакции изменяют цвет с течением времени, а спектрофотометр полезен для измерения различных изменений цвета.

Как работают спектрофотометры?

Спектрофотометр использует источник света для создания отдельных длин волн видимого света, одновременно создавая длины волн света в инфракрасном и ультрафиолетовом диапазонах. Дифракционная решетка и фильтры делят свет на отдельные длины волн, направляя небольшой диапазон длины волны через предоставленный образец. Фотодетектор преобразует свет, полученный через образец, в ток, отправленный в процессор сигналов. После того, как процессор сигналов преобразует ток, значения концентрации, поглощающая способность и коэффициент пропускания отображаются на цифровом дисплее прибора.

Устройство спектрофотометра

Каковы компоненты спектрофотометра?

Спектрофотометр имеет несколько частей, которые включают фильтр, фотодетектор, источник света и процессор сигналов. Однако два основных компонента состоят из фотометра и спектрометра. Фотометр измеряет интенсивность света, в то время как спектрометр измеряет, производит и рассеивает свет. Эти компоненты объединяются, образуя два разных типа спектрофотометра.

Типы спектрофотометров

  1. однолучевой;
  2. двухлучевой;
Существуют однолучевой спектрофотометр и двухлучевой спектрофотометр. Спектрофотометр с двойным лучом сравнивает интенсивность света между двумя световыми путями, в то время как однолучевой спектрофотометр измеряет интенсивность света до и после каждого образца. Спектрофотометр с двойным лучом измеряет коэффициент отражения различных жидких растворов и образца для испытаний, прежде чем давать точные значения на цифровом дисплее. Однако эти значения варьируются от 20 до 2500 нанометров.

Как использовать спектрофотометры?

Для использования спектрофотометра очистите кювету. Важно надеть перчатки, так как любые отпечатки пальцев или грязь, могут повлиять на результаты. Затем добавьте раствор и установите спектрофотометр на предпочтительную длину волны. Поместите пустую кювету внутрь инструмента и нажмите кнопку «установить нуль», чтобы калибровать прибор на желаемую длину волны. Добавьте решение для расчета поглощающей способности.

Закон Беэр-Ламберта в Спектрофотометрии

Для использования спектрофотометра важно понимать само понятие "спектр света" и знать закон Бера-Ламберта. Спектр состоит из радуги цветов, создаваемых, когда композитный свет, такой как белый свет, разделяется на несколько компонентных цветов. Спектрофотометрия использует источник света, коллиматор, монохроматор, раствор и детектор.

Уравнение закона Беэр-Ламберта показывает линейную зависимость между впитывающей способностью и концентрацией образца. Это понимание требует определения того, что поглощающая способность прямо пропорциональна длине пути кюветы, а также любому поглощению предпочтительного образца. Реакции измеряются увеличением поглощения, поскольку наблюдаются изменения цвета. Научные машины, такие как спектрофотометры или микроскопы, помогают улучшить исследования в лабораториях химии, биологии и биохимии.

Где применяется спектрофотометр и как измеряет? Все, что Вы должны знать

Как уже говорилось, спектрофотометр является одним из научных инструментов, широко распространенных во многих исследовательских и промышленных лабораториях. Спектрофотометры используются для исследований в лабораториях физики, молекулярной биологии, химии и биохимии. Как правило, название относится к ультрафиолетовой видимой (UV-Vis) спектроскопии.

Энергия света зависит от длины волны, обычно обозначаемой как лямбда. Хотя электромагнитный спектр распространяется в огромном диапазоне длин волн, большинство лабораторий может измерять только небольшую их часть. UV-Vis Spectroscopy измеряет от 200 до 400 нанометров (нм) для измерений ультрафиолетового света и до приблизительно 750 нм в видимом спектре.

Для УФ-видимой спектроскопии образцы обычно содержатся и измеряются в небольших контейнерах, называемых кюветами. Они могут быть пластичными, если используются в видимом спектре, но должны быть кварцевыми или плавлеными кварцами, если используются для измерений в ультрафиолетовых лучах. Есть некоторые машины, которые могут использовать стеклянные пробирки.

Видимая спектроскопия часто используется в промышленности для колориметрии. Используя этот метод, образцы измеряются на нескольких длинах волн от 400 до 700 нм, и их профили поглощения сравниваются со стандартом. Этот метод часто используется производителями текстиля и чернил. Другими коммерческими пользователями UV-Vis Spectroscopy являются судебно-медицинские лаборатории и принтеры.

В биологических и химических исследованиях растворы часто измеряются путем измерения степени поглощения света на определенной длине волны. Значение, называемое коэффициентом экстинкции, используется для расчета концентрации соединения. Например, лаборатории молекулярной биологии используют спектрофотометры для измерения концентрации образцов ДНК или РНК. Иногда у них есть продвинутый аппарат, называемый спектрофотометром NanoDrop ™, который использует долю количества образца по сравнению с тем, который используется традиционными спектрофотометрами.

Чтобы количественная оценка была действительной, образец должен соответствовать закону Бера-Ламберта. Это требует, чтобы поглощение было прямо пропорционально длине пути кюветы и поглощению соединения. Есть таблицы коэффициентов вымирания, доступные для многих, но не для всех соединений.

Многие химические и ферментативные реакции меняют цвет с течением времени, и спектрофотометры очень полезны для измерения этих изменений. Например, ферменты полифенолоксидазы, которые приводят к коричневому цвету плодов, окисляют растворы фенольных соединений, превращая прозрачные растворы в те, которые имеют видимую окраску. Такие реакции могут быть проанализированы путем измерения увеличения поглощения при изменении цвета. В идеале скорость изменения будет линейной, и по этим данным можно рассчитать показатели. Более продвинутый спектрофотометр будет иметь термостатированный кюветный держатель для проведения реакций при точной температуре, идеальной для фермента.

Микробиологические и молекулярно-биологические лаборатории часто используют спектрофотометр для измерения роста культур бактерий. Эксперименты по клонированию ДНК часто проводятся на бактериях, и исследователи должны измерить стадию роста культуры, чтобы знать, когда проводить определенные процедуры. Они измеряют поглощение, которое известно как оптическая плотность (OD), на спектрофотометре. По ОД можно судить, активно ли делятся бактерии или начинают ли они умирать.

Спектрофотометры используют источник света для освещения массива длин волн через монохроматор. Затем это устройство пропускает узкую полосу света, и спектрофотометр сравнивает интенсивность света, проходящего через образец, с интенсивностью света, проходящей через контрольное соединение. Например, если соединение растворяют в этаноле, эталоном будет этанол. Результат отображается как степень поглощения разности между ними. Это указывает на поглощение образца соединения.

Причиной такого поглощения является то, что как ультрафиолетовый, так и видимый свет имеют достаточно энергии для возбуждения химических веществ до более высоких уровней энергии. Это возбуждение приводит к более высокой длине волны, которая видна, когда поглощение наносится на график в зависимости от длины волны. Различные молекулы или неорганические соединения поглощают энергию на разных длинах волн. Те с максимальным поглощением в видимой области видны как окрашенные человеческим глазом.

Растворы соединений могут быть прозрачными, но поглощать в УФ-диапазоне. Такие соединения обычно имеют двойные связи или ароматические кольца. Иногда имеется один или несколько обнаруживаемых пиков, когда степень поглощения отображается в зависимости от длины волны. Если это так, это может помочь в идентификации некоторых соединений путем сравнения формы графика с формой известных контрольных графиков.

Существует два типа ультрафиолетовых спектрофотометров: однолучевой и двухлучевой. Они отличаются тем, как они измеряют интенсивность света между эталонным и тестовым образцом. Двухлучевые машины измеряют эталонный и тестовый состав одновременно, в то время как однолучевые машины измеряют до и после добавления тестируемого состава.
УФ-спектрофотометр измеряет видимый свет
УФ-спектрофотометр измеряет видимый свет.

Регистрация